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Estudio anátomo-histopatológico y ultraestructural de testículos de pavos
(Meleagris gallopavo) que recibieron furazolidona en sus dietas
M. F. Peralta, R. D. Miazzo, M. A. Koncurat y A. B. Vivas!
Facultad de Agronomía y Veterinaria, Universidad Nacional de Río Cuarto, Ruta 36 Km. 601, 5800-Río Cuarto.
Anatomy-histopathologic and ultrastructure of turkey’s testis (Meleagris gallopavo) treated with furazolidone in its diets ABSTRACT: Furazolidone (Fz) is a nitrofuran member used like preventive or therapeutic drug in poultry productions.
Notwithstanding, it produces damages in reproductive variables. The purpose of this study was to determine the effects of Fz on the testicular anatomyc-histopathology and ultrastructure of turkeys treated with the drug since the first day of life.
Twenty two one-day old male turkey were randomly assigned to receive or not Furazolidone in the diet at 0.04% w/w during 45 weeks. Macroscopic, microscopic and ultrastructural morphology of the testis were analyzed. Localized cysts and normal testicular tissue were observed macroscopically in the treated group. Microscopically these cysts presented dilated seminif- erous tubules with only Sertoli cells, without germinal line and interstitial tissue was compressed. An important lipid degen- eration and necrotic cells were saw at electronic microscope. In the macroscopically normal appearing areas, the cells of the germinal line delayed presented lipid vacuoles. An inter and intra lipidic degeneration, basal lamina increased, picnotic cells and protein fibrils bundles. It can be concluded that Furazolidone in the diet at 0.04% w/w during 45 weeks produces cystic patch with lipidic degeneration (inter and intratubular) and germinal line loss and normal testicular tissue with delayed ger- Key words: Furazolidone, turkey’s testis, testis morphology 2002 ALPA. Todos los derechos reservados Arch. Latinoam. Prod. Anim. 2002. 10(2): 77-80 RESUMEN: La furazolidona (Fz) es un nitrofurano utilizado como preventivo o terapéutico en producciones aviares,
pero produce alteraciones en variables reproductivas. El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto de Fz incorporado en la dieta sobre la anátomo-histopatología y la ultraestructura de los túbulos seminíferos de testículos de pavos. Se utilizaron 22 pavos machos de un día de edad, que fueron divididos en dos grupos: Tratados y Controles. El primer grupo recibió la droga mezclada en el alimento, a una dosis de 0,04% p/p, durante 45 semanas, el otro grupo recibió el alimento sin medica- ción. Se analizó la anátomo-histopatología y la ultraestructura del testículo. En el análisis macroscópico de las gónadas, en las aves tratadas se advirtieron quistes focalizados y zonas de tejido testicular normal. Los quistes microscópicamente se presentaron como túbulos marcadamente dilatados, con células de Sértoli, ausencia de la línea germinal y con intersticio comprimido. La utraestructura de los mismos reveló importante degeneración lipídica y células necróticas. En la zona testi- cular de aspecto normal, dentro de los túbulos se advirtieron numerosas vacuolas lipídicas en las células de la línea germinal retrasada. Además, la ultramicroscopía detectó degeneración grasa inter e intratubular, alteraciones de la membrana basal, células picnóticas y depósito de fibras proteínicas. Se concluye que la furazolidona, administrada a dosis de 0,04% p/p du- rante 45 semanas, produjo en el testículo de pavo zonas quísticas conteniendo degeneración lipídica (tubular e intertubular) y pérdida de la línea germinal y zonas normales con retraso en la línea germinal.
Palabras clave: Furazolidona, testículos de pavo, morfología testicular.
Recibido Septiembre 28, 2001. Aceptado Junio 6, 2002 Producción Avícola, Departamento de Producción Animal.
Área de Microscopía Electrónica, Departamento de Patología Animal.
!Histología, Departamento de Anatomía Animal.
Introducción
Cuadro 1. Composición del alimento balanceado según la La furazolidona (Fz) es un integrante de los nitrofuranos, utilizados en animales de granja como profiláctico ó tera- péutico contra un amplio rango de bacterias y protozoos.
Sin embargo, se han observado efectos adversos en algunas variables productivas y reproductivas, luego de la adición de esta droga en la dieta de aves. Por ejemplo, se ha detecta- do disminución en el peso gonadal, descenso en variables histomorfométricas testiculares y retraso en la línea germi- nal en pollos parrilleros sexualmente maduros, que habían recibido dosis de 0,015 a 0,035% de furazolidona en la die ta, durante 5 semanas (Andrabi, et al., 1998). Asimismo, en pollos púberes tratados con furazolidona a dosis de 0,04% p/p durante períodos de tiempo prolongado y dosis de 0,04-0,08% p/p durante 4 semanas, se notó descenso en las variables histomorfométricas y retraso en la línea germinal (Miazzo et al., 1998; Peralta, et al., 1996). Inclusive en pa- vos púberes, que habían recibido 0,04% p/p de furazolidona durante períodos de tiempo prolongados, se notó dilatacio- nes testiculares quísticas, descenso de las variables histo- morfológicas, y notable retraso en la línea germinal (Peral- Otras investigaciones analizando las alteraciones mi- croscópicas y ultramicroscópicas testiculares, advierten distinto grado de alteración en los túbulos seminíferos, lle- gando a la ausencia de la línea germinal en patos que habían recibido Fz desde el nacimiento, a dosis altas durante perío dos prolongados (Webb y Van Vleet, 1990, 1991).
Debido a los efectos nocivos observados en trabajos an- *Microingredientes del Núcleo vitamínico Mineral (Basf-Argenti- teriores en testículos de pavos, el objetivo de este trabajo Minerales (ppm): Yodo: 1,5; Manganeso: 120,0; Hierro: 80,0; Zinc: fue estudiar el efecto de la Furazolidona, adicionada en el alimento a dosis de 0,04% p/p durante 45 semanas, sobre la Vitaminas: A: 12000 UI/kg, D!: 4500 UI/kg, E: 45 UI/kg, K: 2,5 anátomo-histopatología y la ultraestructura de los túbulos mg/kg; B: 3,0 mg/kg, B : 15,0 mg/kg; B$: 5,0 mg/kg; B : 0,04 mg/kg; seminíferos de testículos de pavos.
Biotina: 0,3 mg/kg; Niacina: 100,0 mg/kg; Colina: 600 mg/kg.
Materiales y Métodos
por día, hasta lograr un fotoperíodo de 14 horas luz: 10 ho- Se utilizaron 22 pavos machos, línea Hybrid, de 1 día de edad, que fueron pesados, individualizados y distribuidos al Estudios macro y ultramicroscópico del testículo: finali- azar en dos grupos: TRATADOS y CONTROLES. Las zado el período experimental, se sacrificaron las aves (11 aves fueron alojadas en dos corrales, de 4 x 4 m cada uno, en Controles y 11 Tratadas) por sangría a blanco y se les extra- la Unidad de Cría Aviar de la Universidad Nacional de Río jeron ambos testículos, en acuerdo a las normas estableci- Cuarto. Dicha Unidad reúne las condiciones ambientales y das por el Comité de Bienestar Animal de la Universidad de manejo exigidas para la cría de este tipo de animales. El Nacional de Rio Cuarto. Para realizar el análisis anátomo- primer grupo recibió Fz (Lab. Nutrer, 98% de pureza) en el histopatológico las muestras fueron fijadas en formol tam- alimento, a una dosis de 0,04% p/p, durante 45 semanas, ponado y posteriormente fueron teñidas con hematoxilina- mientras que el Control no recibió la droga. Las dietas fue- eosina, de acuerdo a la técnica convencional. Para el análi- ron fabricadas en la planta piloto de alimentos balanceados sis ultramicroscópico, las muestras fueron fijadas con glu- de la Unidad de Cría Aviar y fueron administradas de acuer- taraldehído al 2,5%, en tampón fosfato, refijadas con tetrá- do a los requerimientos nutricionales, según la edad de los xido de osmio, deshidratadas e incluidas en EMBED 812 animales (Cuadro 1). Tanto el agua como el alimento fue- (Electron Microscopic Sciences). Los cortes ultrafinos se ron provistos ad libitum. En cuanto al manejo de la luz, los contrastaron con acetato de uranilo y citrato de plomo. La pavos recibieron, durante las primeras 24 h de vida, luz con- observación se realizó en un microscopio electrónico (El- tinua y posteriormente se fue reduciendo la misma una hora Estudio de testículos de pavo con dieta de furazolidona Resultados y Discusión
El análisis anátomo-histopatológico de las gónadas de las aves tratadas reveló la presencia de quistes, con un con- tenido acuoso y de aspecto traslúcido en el 30% de los órga- nos. Generalmente se presentaban en el polo superior de los testículos izquierdos mientras que el resto del órgano pre- Estas observaciones concuerdan con las registradas por Webb y Van Vleet,1990 y Khan et al.,1995, aunque estos investigadores notaron alteraciones más severas: quistes abarcando gran parte del órgano en patos y pollos púberes que recibieron altas dosis de Fz, durante un período breve de tiempo (0,0025-0,007% p/p durante 28 días).
En el análisis histopatológico de la zona quística men- Figura 1. Fotomicrografía electrónica de túbulo seminífero cionada anteriormente, se observaron túbulos hiperplási- de la zona testicular quística. Se advierte marcada cos, tapizados sólo por células de Sértoli con ausencia de la degeneración grasa (DG). Nótese la célula necró- línea germinal. Las células de Leydig se notaron comprimi- tica (CN) y los depósitos de fibrillas de proteínas das, pero secretoras. Por su parte, en el análisis histológico de la zona de apariencia macroscópica normal, la línea ger- minal de las aves tratadas se presentaba desordenada, prin- cipalmente en estadíos de espermatocitos I y espermátides, ambos tipos de células rodeados de vacuolas lipídicas y unos pocos espermatozoides. Por el contrario los túbulos de las aves controles presentaron una espermatogénesis nor- mal, con un alto porcentaje de espermatozoides y unas po- cas espermátides en transformación.
La existencia de grandes cantidades de espermatocitos I muestra una detención en el proceso de espermatogénesis a este nivel. Por lo que se podría hipotetizar que el espermato- cito I sería la célula blanco de la toxicidad de la Fz. Estas observaciones concuerdan con las registradas por otros in- vestigadores en pavos y pollos que habían recibido este ni- trofurano a igual dosis que en esta experiencia, pero durante períodos de tiempos diferentes (entre 8 a 40 semanas) (An- Figura 2. Fotomicrografía electrónica de túbulo seminífero drabi, et al., 1998 y Siddique, et al., 1996; Miazzo et al., de zona testicular de aspecto normal. Se observa 1998; Peralta et al., 1996, 1997, Peralta, M. F., 1999).
degeneración grasa (DG). Túbulos seminíferos En el análisis ultraestructural de la zona testicular quísti- con inclusiones lipídicas (IL), citoplasma de as- ca se observó marcada degeneración grasa. En el intersticio pecto granular (CG) y alteraciones en la membra- se detectaron células necróticas y depósito de fibrillas de na basal (MB). Nótese la degeneración grasa tam-bién en el espacio intersticial (DG), células picnó proteína, semejantes a colágeno (Figura 1). Por su parte, en ticas (CP) y depósito de fibrillas de proteínas el análisis de la zona testicular de apariencia normal, se ob- servó degeneración grasa y los túbulos seminíferos presen- taban inclusiones lipídicas. Las células germinales se pre- sentaban desordenadas, con citoplasma de aspecto granular de la membrana basal, grandes depósitos de fibrillas de co- y alteraciones de la membrana basal. Además, en el espacio lágeno y un aumento de vasos sanguíneos, correlacionado intersticial también se observó degeneración grasa, células con un descenso en los niveles de testosterona.
con núcleo picnótico denso y depósito de fibrillas de proteí- Coincidiendo con algunas de nuestras observaciones, nas (Figura 2). Las pocas espermátides que se encontraban, Ali et al. (1988) advierten un descenso en la producción de se observaron sin integridad de membrana y rodeadas de espermatocitos I, espermatozoides con envoltura nuclear arrugada y espermátides con retículo endoplásmico disten- Nuestros hallazgos concuerdan parcialmente con las ob- dido, en pavos que habían recibido esta droga a altas dosis servaciones de Gruenewald, D. et al., (1994) y de Ichihara, I. et al (1993) realizadas en túbulos seminíferos de ratas Por su lado, en el estudio ultraestructural de patos púbe- adultas, ya que describen la coexistencia de túbulos atrófi- res, Webb y Van Vleet (1991) encuentran una gradación en cos y relativamente normales con incremento en el grosor la patología, que va desde numerosas vacuolas lipídicas to tóxico los espermatocitos I y las espermátides. Sin em- bargo, el mecanismo por el cual se producen dichos efectos no está totalmente dilucidado, ya que podría estar relacio- nado con alteraciones en los niveles de testosterona, ó LH o en el mecanismo de acción de ambas hormonas, lo que será motivo de ulteriores investigaciones.
Agradecimientos
Los autores agradecen a la Secretaría de Ciencia y Téc- nica de la Universidad Nacional de Río Cuarto, al Consejo Nacional de Investigación Científico y Técnica y al Conse- jo de Investigación de Córdoba por el aporte económico sin el cual hubiera sido imposible la realización de esta investi- gación. Además, un agradecimiento muy especial al Institu- Figura 3. Fotomicrografía electrónica de espermátide. Nó- tese la pérdida de integridad de membrana (M) y to Nacional de Tecnología Agropecuaria de Pergamino la presencia de vacuolas lipídicas (VL) rodeando (Buenos Aires) por su aporte técnico.
Literatura Citada
Ali, B., J. Silsby, K. Loseth, B. Crabo y M. El Hallawani. 1988. Some ef- sólo en las células de Sértoli, con organelas sin alteraciones fect of furazolidone on the testis and plasma levels of testosterone lu- y unas pocas espermatogonias de aspecto normal hasta la teinizing hormone and prolactin in mature male turkeys. Int. J. An- ausencia total de la línea germinal con túbulos tapizados sólo por células epiteliales. A juzgar por el reemplazo del Andrabi, S., Ahmad, M. y Shahab, M. 1998. Furazolidone treatment sup- epitelio seminífero y células de Sértoli por células epitelia presses pubertal testosterone secretion in male broiler breeder. Vet.
les indiferenciadas de los túbulos, parecería que el efecto de Gruenewald, D., Naai, M., Hess, D. y Matsumoto, A. 1994. The brown la droga en los patos púberes, se manifestó de manera dife- norway rat as a model of male reproductive aging: evidence for both rente que en los pavos sexualmente maduros de esta investi- primary and secondary testicular failure. J. of Gerontology 49 (2): gación. Asimismo, estos autores afirman que el mecanismo Ichihara, I., Kawamura, H. y Pelliniemi, L. 1993. Ultraestructure and mor- que indujo estos cambios en los túbulos es muy semejante a phometry of testicular Leydig cells and the interstitial components la toxicosis con cloruro de sodio, sin embargo, de acuerdo a correlated with testosterone in aging rats. Cell Tissue Res 271: 241- nuestros estudios y los de otros investigadores, los mecanis- Khan, M., Zaman, Q., Islam, N y Muhammad, G. 1995. Furazolidone toxi- mos de una y otra toxicosis serían muy diferentes (Miazzo cosis in young broiler chicks: morphometric and pathological obser- et al., 1998 y Peralta et al., 1996,1997). Posiblemente, este vations on heart and testes. Vet. Hum. Toxicol. 37 (4): 314-318.
retraso en la espermatogénesis se produzca por alteraciones Miazzo, R.D., A. Vivas and M. F Peralta. 1998. Histomorphometric re- en el número de receptores de LH y/o en la unión de esta searchs on the furazolidone treated cockerel (Gallus domesticus) tes- hormona a su receptor. Esto generaría una respuesta inefi tes through digital imagen. Biocell. 22 (2): H.13.
Peralta, M. F., A. Vivas, R. D. Miazzo, R. Bosch y E. Moschetti. 1996.
ciente a la testosterona, provocando descenso en los niveles Efecto de la furazolidona sobre testículo de pollo prepúber (Gallus de este esteroide que es fundamental para el desarrollo efi- domesticus). Avances en Producción Animal, 21 (1-2): 190-196.
caz de la línea germinal. Además, posiblemente sus resulta- Peralta, M. F., A. Vivas, R. D. Miazzo y S. Ferrero. 1997. Disminución de dos morfológicos se deban a que la dosis era casi el doble, la altura del epitelio seminífero de testículos de pavos (Meleagris ga- llopavo) al adicionar furazolidona en sus dietas (Resultados prelimi- 0,07% p/p versus 0,04% p/p, evitando que los pavos gene- nares). Archivos Latinoamericanos de Producción Animal 5 ren mecanismos alternativos contra la injuria de la droga, ó que ellos tengan mayor sensibilidad al efecto de la Fz por Peralta, M. F. 1999. Efecto de la furazolidona sobre el eje hipotálamo-hi- pófiso-gonadal en pavos machos (Meleagris gallopavo). Tesis Ma- gister en Cs. Agropecuarias y Veterinarias, mención Reproducción Se concluye que la furazolidona, administrada a dosis de Animal. P. 120, Río Cuarto, Córdoba.
0,04% p/p, durante 45 semanas, produjo en el pavo degene- Siddique, M., M. Khan, G. Muhammad y N. Islam. 1996. Reversibility of ración grasa testicular. En algunos túbulos el daño produci- furazolidone induced changes in testes and secondary sex characters do por la degeneración grasa es irreversible desde la línea of White Leghorn cockerels. Vet. Hum. Toxicol., 38 (6): 413-417.
Webb, D. and J. Van Vleet. 1990. Cystic Testicular degeneration in fura- germinal, afectando también el espacio intersticial y produ- zolidone toxicosis of sexually immature ducks. Avian Dis. 34: 693- ciendo pérdida de la línea germinal. En otras zonas tubula- res produjo línea germinal desordenada, con alteraciones en Webb, D. and J. Van Vleet. 1991. Ultraestructural alterations in fura- las células germinales, siendo uno de los blancos de su efec zolidone induced cystic testicular degeneration in ducklings. Avian

Source: http://produccionbovina.com/produccion_aves/produccion_avicola/31-testiculos_pavos_furazolidona.pdf