Algoritmo para el estudio de las disgammaglobulinemias

Resistencia antimicrobiana y epidemiología entérica serovar Enteritidis aisladas en las provincias de Chaco y Corrientes (Argentina) biotipos, fagos y colicinas, pruebas de susceptibilidad antimicrobiana, perfil plasmídico, análisis del ADN cromosómico total por electroforesis en campo pulsátil (PFGE), estudio de secuencias IS200, análisis mediante PCR de las secuencias REP (repetitive extragenic (1) Instituto de Medicina Regional. Universidad palindromic) y ERIC (enterobacterial repetitive intergenic Nacional del Nordeste. Av. Las Heras 727. 3500 Resistencia (Argentina). Correo electrónico: (2) Centro de Salud Internacional. IDIBAPS, Objetivos
Los objetivos del presente proyecto fueron estudiar (3)Dpto. de Microbiología. Instituto de Infecciones e la resistencia antimicrobiana de cepas de Salmonella Inmunología. IDIBAPS, Hospital Clínic. Barcelona (España). Enteritidis de origen humano aisladas de muestras provenientes del Nordeste de Argentina, e investigar la relación epidemiológica existente entre las diferentes cepas. Introducción
Las infecciones causadas por cepas de Salmonella Materiales y métodos
pueden producir patologías que varían en severidad desde disturbios intestinales leves hasta la muerte, y aunque los Se analizaron 24 cepas de Salmonella spp antimicrobianos no son esenciales para el tratamiento de la recuperadas entre 1997 y 2003 a partir de pacientes mayoría de los casos de infecciones intestinales, son útiles atendidos en centros asistenciales privados y estatales de en las infecciones extraintestinales y en pacientes las provincias de Chaco y Corrientes (Argentina). Seis de ellas provenían de dos brotes de intoxicación alimentaria y el resto eran aislamientos sin relación epidemiológica (Salmonella Enteritidis) representa el serotipo más frecuente en Argentina12 así como en otros países11. Entre Mediante pruebas bioquímicas clásicas3 se 1998 y 1999 se encontró que a escala nacional el 45,9% de procedió a confirmar la identidad de las cepas, las que los aislamientos correspondía a este serotipo, seguido por fueron conservadas en agar blando a temperatura ambiente S. Infantis (19,2%), S. Agona (16,1%) y S. Typhimurium y en caldo glicerinado al 15% a -20ºC a fin de ser utilizadas Para lograr una efectiva vigilancia sobre la Se realizó una identificación serológica inicial sensibilidad a los antimicrobianos y para poder desarrollar mediante técnica de aglutinación en placa con antisueros estrategias racionales de control, es crucial la disponibilidad polivalentes dirigidos contra los antígenos somáticos de de datos seguros y detallados acerca de la epidemiología de Salmonella. Con estos propósitos, se han utilizado posteriormente las cepas fueron enviadas al Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas ANLIS “Dr. Carlos epidemiológicos para diferenciar los aislamientos de G. Malbrán” (Buenos Aires, Argentina) donde se determinó serovares de Salmonella provenientes de diferentes la serovariedad mediante la determinación de los antígenos orígenes, entre las cuales se incluyen la tipificación por somáticos y flagelares y sus respectivos factores. Las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana se realizaron mediante el método de difusión con discos según recomendaciones Committee for Clinical Laboratory Standards - NCCLS)9 frente a ampicilina 10 g (AMP), ampicilina/sulbactama 10/10 g AMS), cefalotina 30 g (CEF), gentamicina 10 g (GEN), ciprofloxacino 5 g (CIP), ácido nalidíxico 30 g (NAL), colistina 10 g (COL), fosfomicina 200 g (FOS), tetraciclina 30 g (TET), cloranfenicol 30 g (CMP), neomicina 30g (NEO), furazolidona 100 g (FUR), trimetoprima/sulfametoxazol 1,25/23,75 g (TMS) y sulfisoxazol 300 g (SUL). El control de calidad se realizó utilizando las cepas En cuanto a la aplicación de la técnica de REP- de Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus PCR, los mejores resultados en el presente trabajo se ATCC 25923, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 y obtuvieron al utilizar los iniciadores REP1 solamente, pudiéndose clasificar a los aislamientos en 5 perfiles de bandas a los cuales se les asignaron letras mayúsculas de La producción de -lactamasas se determinó en las cepas resistentes a ampicilina mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR), utilizando los iniciadores para blaTEM (5’-TTGGGTGCACGAGTGGGTTA-3’ y 5’- Fig.2. Patrones de ADN de Salmonella Enteritidis generados mediante REP-PCR y separados en gel de ATGCGTTATATTCGCCTGTG-3’ y 5’-ttagcgttgccagtgctcg3’- agarosa al 2%. Las letras asignadas a las líneas ) y parámetros de amplificación previamente descriptos6. Como controles positivos se utilizaron cepas poseedoras de genes codificantes de las -lactamasas estudiados. La técnica de amplificación de secuencias REP (repetitive extragenic palindromic) por PCR fue aplicada usando ACGCCTTATCCGGCCTAC-3’) en forma conjunta y por separado de acuerdo al método descripto previamente2. De cada producto final de la PCR, 20 l se sometieron a electroforesis sobre gel de agarosa al 2% conteniendo 0,5  En definitiva, las cepas estudiadas pudieron clasificarse en 9 patrones epidemiológicos (I a IX) los cuales se obtuvieron combinando los perfiles de susceptibilidad frente a FUR y AMP con los patrones de Resultados
banda obtenidos mediante REP-PCR, los cuales se La edad de los pacientes a partir de los cuales se aislaron las cepas varió entre 7 y 44 años, con una media de 27,5 años. Un aislamiento fue obtenido de esputo de un paciente inmunosuprimido ingresado en una Unidad de Discusión
Cuidados Intensivos, otro aislamiento fue recuperado de Dentro de la resistencia adquirida en Salmonella orina de un paciente del sexo femenino sin síntomas Enteritidis, preocupa principalmente la resistencia a gastrointestinales pero portador de Salmonella en heces y betalactámicos, quinolonas y trimetoprima/sulfametoxazol, el resto fue obtenido de heces de pacientes con debido a que son antimicrobianos de elección en el En el presente trabajo, los resultados de las pruebas de sensibilidad antimicrobiana mostraron que todos los aislamientos fueron sensibles a AMS, CEF, COL, FOS, Salmonella, TEM-1 es la que más frecuentemente se TET, CMP, NEO, GEN, NAL, CIP, TMS y SUL, pero asocia con la resistencia AMP y CEF en Argentina, mientras presentaron variaciones en la sensibilidad frente a FUR (13 que SHV es menos frecuente12, precisamente es esta cepas resistentes) y AMP (2 cepas resistentes). clase de betalactamasa la encontrada en el presente trabajo. En las cepas resistentes a AMP se obtuvo un fragmento de 850 bp con los cebadores para blaTEM Debe destacarse el hecho de que más del 50% de las cepas de Salmonella Enteritidis incluidas presentaron resistencia sólo a FUR, en concordancia con los resultados infecciosos que de otra manera sólo hubieran quedado en hallados a nivel nacional por Rossi y cols., quienes informaron una resistencia del 34,3% frente a ese antimicrobiano, mientras que frente a AMP sólo el 11% fueron resistentes12. Sin embargo, Tassios y cols. Agradecimientos
estudiaron en Grecia los aislamientos de Salmonella Enteritidis durante los años 1987 a 1993 y hallaron que Los autores expresan su agradecimiento a la sobre 300 cepas, el 25% fueron resistentes a FUR, Sociedad Española de Infectología y Microbiología Clínica y resistencia superada sólo por AMP y SUL13, lo cual indica a la Secretaría General de Ciencia y Técnica de la U.N.N.E. que la variación entre países es muy grande y podría estar por la ayuda otorgada para que el Bioq. Luis A. Merino influida por el grado de utilización de este antimicrobiano en realice parte de este trabajo en los laboratorios del Hospital Clínic de Barcelona; al personal del Instituto de Infecciones e Inmunología IDIBAPS del Hospital Clínic por la La identificación de la relación genética entre colaboración brindada y a las bioquímicas Cech, Lodeiro, aislamientos bacterianos a partir de una epidemia o el Cacciamani, Pato, Esquivel, Pellegrino y Gómez Omil estudio de la persistencia endémica de ciertas cepas es deMonzón, por la provisión de las cepas incluidas en el frecuentemente una cuestión crítica para tomar decisiones orientadas hacia la prevención de la diseminación de la infección y erradicación de la fuente. Numerosos trabajos acerca de este hecho pueden ser encontrados en Bibliografía
publicaciones científicas, en los cuales fueron aplicados métodos feno y genotípicos para diferenciar aislamientos 1. Adesiyun A, Carson A, McAdoo K, Bailey C. Molecular humanos, animales, alimentarios y ambientales de analysis of Salmonella Enteritidis isolates from the Caribbean by pulsed-field gel electrophoresis. Pan Am J Public Health 2000; 8:342-347. El patrón genómico basado en las técnicas de 2. Beyer, W.; Mukendi, F.M.; Kimming, P., Böhm, R. REP-PCR, ha sido hallado de utilidad para tipificar aislamientos esporádicos y epidémicos de Salmonella. fingerprinting for characterising epidemic isolates of Versalovic y cols. aplicaron la técnica de PCR para Salmonella enterica serovar Saintpaul. J Clin Microbiol amplificar las secuencias REP en diferentes serovares de Salmonella y otras bacterias gramnegativas14. Chmielewski 3. Bopp CA, Brenner FW, Wells JG, Strockbine NA. y cols. compararon el poder de discriminación de los Escherichia, Shigella and Salmonella. En: Murray PR, perfiles obtenidos mediante REP-PCR y ERIC-PCR y Baron EJ, Pfaller MA, Tenover FC, Yolken FC (eds). concluyeron que ambas técnicas resultaron muy útiles para Manual of Clinical Microbiology, 7th ed. Washington, la tipificación de Salmonella Enteritidis5. 4. Centers for Disease Control and Prevention. Preliminary En el presente trabajo la tipificación mediante FoodNet data on the incidence of foodborne illness - amplificación de secuencias repetitivas fue más útil para Selected sites, United States, 1999. Morb Mortal Wkly descartar la relación clonal entre aislamientos con igual perfil de susceptibilidad antibiótica y aunque se pudieron diferenciar los aislamientos en varios genotipos, la Mazurkiewicz M, Ugorski M. Comparison of ITS profiling, aplicación de otras técnicas de tipificación como ERIC-PCR REP- and ERIC-PCR of Salmonella Enteritidis isolates y PFGE7,10 ayudaría a confirmar o descartar la relación fron Poland. J Vet Med 2002; B49:163-168. genética entre aquellos que presentaron igual patrón de 6. Gallardo F, Ruiz J, Towner KJ, Vila J. Increase in bandas pero que no poseían una relación epidemiológica incidence of resistance to ampicillin, chloramphenicol and trimethoprim in clinical isolates of Salmonella Según los datos existentes en la bibliografía1,4, serotype Typhimurium with investigation of molecular Salmonella Enteritidis es el principal serotipo implicado epidemiology and mechanisms of resistance. J Med tanto en brotes de origen alimentario como en casos “aparentemente” esporádicos, el estudio de la relación 7. Milleman Y. Les marqueurs épidémiologiques des clonal de las cepas mediante diferentes marcadores ayudaría a comprender mejor la real epidemiología de las 8. Miller SI, Hohmann EL, Pegues DA. Salmonella (including Salmonella Typhi). In: Mandell GL, Bennett JE, Dolin R (eds). Principios y práctica. vol. 2. 4th edn. Editorial Médica Panamericana, Bs. As. 1997: 2013- Conclusión
9. National Committee for Clinical Laboratory Standards. La aplicación de técnicas de tipificación molecular Performance standards for antimicrobial susceptibility en combinación con características fenotípicas y datos testing; 9th Informational Supplement. NCCLS, 940 epidemiológicos permitió confirmar la existencia de brotes West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania. Book of the 9th International Congress on Infectious Diseases, Buenos Aires, Argentina. 2000: 86. 10. Olive DM, Bean P. Principles and applications of 13. Tassios PT, Markogiannakis A, Vatopoulos AC, et al. methods for DNA-based typing of microbial organisms. J Molecular epidemiology of antibiotic resistance of Salmonella Enteritidis during a 7-year period in Greece. 11. Preliminary Foodnet data on the incidence of foodborne illness - Selected sites, United States, 1999, Morb Mortal 14. Versalovic J, Koeuth T, Lupski JR. Distribution of repetitive DNA sequences in eubacteria and application 12. Rossi MA, Galas M, Caffer MI, Tokumoto M, Guelfand L, to fingerprinting of bacterial genomes. Nucleic Acids Res Binsztein N. Surveillance of Salmonella enterica antimicrobial resistance en Argentina. Different serovars, different resistance profile. Abstract 43.008. Abstract

Source: http://www.revistabioanalisis.com.ar/arxius/notas/Nota4(17).pdf