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Instituto Politécnico de Castelo Branco
Escola Superior Agrária
Susceptibilidade de Staphylococcus coagulase
positiva isolados de alimentos

Ana Catarina Pires de Almeida

Dissertação apresentada ao Instituto Politécnico de Castelo Branco para cumprimento dos
requisitos necessários à obtenção do grau de Licenciado em Engenharia Biológica e Alimentar,
realizada sob a orientação científica da Doutora Cristina Maria Baptista Santos Pintado,
Professor Adjunto da Unidade Técnico-Científica da Ciência da Vida e dos Alimentos da Escola
Superior Agrária do Instituto Politécnico de Castelo Branco
Agradecimentos

A realização deste trabalho não seria possível sem a contribuição pessoal ou Desde já agradeço ao Eng.º Vítor Amaro Lopes, gerente da Aquimisa consultores Agro-industriais Lda. de Castelo Branco, que me acolheu nesta empresa e me proporcionou a realização deste estágio curricular, bem como aos colaboradores do laboratório, que me integraram na equipa de trabalho e se mostraram sempre disponíveis para o esclarecimento À Dr.ª Cristina Maria Santos Pintado, por ter aceitado ser minha orientadora, e por se mostrar sempre disponível e interessada quando solicitada, um muito obrigado. Aos meus pais, irmã, cunhado e namorado, por toda a paciência e incentivo que demonstraram ao longo destes anos, pois sem eles nada disto seria possível. Agradeço a todos aqueles que directa ou indirectamente contribuíram para a Palavras-chave
Staphylococcus coagulase positiva, segurança alimentar, susceptibilidade, antibióticos. Durante o período de estágio, que decorreu entre Agosto e Novembro de 2010, foram obtidas no laboratório da Aquimisa Consultores Agro-Industriais Lda., em Castelo Branco, 42 culturas de Staphylococcus coagulase positiva, isoladas de vários tipos de alimentos: leites de vaca, cabra e ovelha, queijo curado, salmoura, bolos (jesuíta e caramujo), saladas e cozido à Estas 42 culturas foram posteriormente, e já no Laboratório de Microbiologia da ESACB, submetidas à realização de antibiogramas, verificando-se a susceptibilidade das mesmas a 8 diferentes antibióticos: Eritromicina 15µg, Estreptomicina 10 µg, Kanamicina 30 µg, Neomicina 30 µg, Tetraciclina 30µg, Gentamicina 10µg, Cloranfenicol 30 µg e Vancomicina 30 µg. A realização dos antibiogramas permitiu-nos classificar estas culturas como sensíveis (S), intermédias (I) ou resistentes (R), a cada um dos antibióticos testados. Com os resultados dos antibiogramas concluímos que as culturas se mostraram mais sensíveis aos seguintes antibióticos: Vancomicina 30 µg, Gentamicina 10µg, Cloranfenicol 30 µg e Kanamicina 30 µg, apresentando para todos eles uma percentagem de culturas sensíveis de 100%. Para os antibióticos Eritromicina 15µg e Tetraciclina 30µg observou-se uma maior percentagem de culturas resistentes (2.38%). Apesar de não se observarem culturas resistentes para a Estreptomicina 10 µg observou-se para este antibiótico a menor percentagem de culturas sensíveis (80.95%), devendo-se este facto à elevada percentagem de culturas com sensibilidade intermédia (19.05%). Key-words
Coagulase-positive Staphylococcus, food safety, susceptibility, antibiotics. Abstract
Between August and November 2010, forty-two cultures of coagulase-positive Staphylococcus were isolated from different types of food: cow milk, goat milk, sheep milk, ripened cheese, brine, cakes ("Jesuita" and “Caramujo”), salads, and "Cozido à Portuguesa". This work was done at the laboratory of Aquimisa Consultores Agro-Industriais Lda., Castelo Posteriorly, at the Microbiology Laboratory of ESACB, these forty-two cultures were evaluated for their susceptibility to eight different antibiotics: Erythromycin 15 µg, Kanamycin 30 µg, Streptomycin 10 µg, Neomycin 30 µg, Tetracycline 30 µg, Gentamicin 10 µg, Chloramphenicol 30 µg and Vancomycin 30 µg. The realization of the antibiograms allowed us to classify these cultures as sensitive (S), intermediate (I) or resistant (R) to each antibiotic With the results of antibiograms we can conclude that cultures were more sensitive to the following antibiotics: Vancomycin 30 μg, Gentamicin 10 μg, Chloramphenicol 30 μg and Kanamycin 30 μg, with 100% of sensitive cultures. For the antibiotics Erythromycin 15ug and Tetracycline 30μg there was a higher percentage of resistant cultures (2.38%). Although was not observed cultures resistant to Streptomycin 10 μg, was observed for this antibiotic the lower percentage of sensitive cultures (80.95%) and 19.05% of cultures with intermediate Índice Geral
I. Introdução

II. Revisão bibliográfica
2.2. Intoxicação alimentar Estafilocócica 2.3. Resistência dos Staphylococcus aureus aos antibióticos 2.3.1. Desenvolvimento de bactérias resistentes aos antibióticos 2.5. Características dos antibióticos usados neste trabalho III. Trabalho desenvolvido na Aquimisa
3.1.2. Preparação dos meios de cultura 3.2. Culturas de Staphylococcus coagulase positiva obtidos de 3.3. Contagem de Staphylococcus coagulase positiva IV. Trabalho desenvolvido no Laboratório de Microbiologia da ESACB
4.1.1. Obtenção de culturas jovens de Staphylococcus 4.1.4. Aplicação dos discos de antibióticos V. Resultados e discussão
VI. Conclusão
VII. Bibliografia
Índice de figuras
Figura1- Staphylococcus aureus ao microscópio electrónico de varrimento
Figura2- Método de diluição – determinação da MIC e MBC
Figura3- Colónias de Staphylococcus aureus em BP+RPF
Figura4- Sequência de passos a seguir na contagem de Staphylococcus
Figura5- Metodologia seguida no método de Kirby-Bauer
Figura6- Inoculo já preparado
Figura7- Inoculação das placas de forma a obter-se um crescimento confluente
Figura8- Colocação dos discos a superfície do meio e pressão exercida em
Figura 9- Resultados obtidos para as 42 culturas de Staphylococcus coagulase positiva,
testados para 8 antibióticos cada, num total de 336 ensaios Índice de tabelas
Tabela 1-
Alimentos associados a intoxicação alimentar por Staphylococcus
aureus em diferentes países Tabela 2- Características dos antibióticos usados neste trabalho
Tabela 3- Microrganismos analisados durante o período de estágio
Tabela 4- Culturas de Staphylococcus coagulase positiva e amostras a partir
Tabela 5- Classificação em função dos diâmetros das zonas de inibição
Tabela 6- Analise geral do perfil de susceptibilidade antimicrobiana das
42 culturas de Staphylococcus coagulase positiva avaliadas neste trabalho Tabela 7- Resultados obtidos em mm para os ensaios de susceptibilidade
a 8 antibióticos relativamente a 17 isolados de Staphylococcus coagulase Tabela 8- Resultados obtidos em mm para os ensaios de susceptibilidade
a 8 antibióticos relativamente a 3 isolados de Staphylococcus coagulase Tabela 9- Resultados obtidos em mm para os ensaios de susceptibilidade
a 8 antibióticos relativamente a 6 isolados de Staphylococcus coagulase Tabela 10- Resultados obtidos em mm para os ensaios de susceptibilidade
a 8 antibióticos relativamente a 6isolados de Staphylococcus coagulase positiva de amostras de cozido a portuguesa Tabela 11- Resultados obtidos em mm para os ensaios de susceptibilidade
a 8 antibióticos relativamente a 4 isolados de Staphylococcus coagulase Tabela 12- Resultados obtidos em mm para os ensaios de susceptibilidade
a 8 antibióticos relativamente a 6 isolados de Staphylococcus coagulase Lista de abreviaturas
APT- Água Peptonada Tamponada
ASAE- Autoridade de Segurança Alimentar e Económica HACCP- Hazard Analysis and Critical Control Points NCCLS- National Committee for Clinical Laboratory Standards TBX- Triptone Bile Glucoronic Médium TSA- Teste de sensibilidade a antimicrobianos

Source: http://minerva.esa.ipcb.pt/jspui/bitstream/123456789/376/1/TFC_RES_ANA_ALM.pdf

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